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Gator非标记生物分子分析仪

更新时间:2019-09-26

简要描述:

Gator平台基于Probe Life的生物薄膜干涉光谱技术,可对治疗性生物分子的不同研发阶段实时检测。Gator通过收集传感器探针顶端结合分子数量的变化而引起的光干涉信号达到检测的目的。这有利于蛋白-蛋白相互作用的研究:解离速率筛选,结合常数测定,是/否与靶抗原结合,亲和力成熟和表位结合。

药物研发的工具

中期优化

 

早期研发


Gator平台基于Probe Life的生物薄膜干涉光谱技术,可对治疗性生物分子的不同研发阶段实时检测。Gator通过收集传感器探针顶端结合分子数量的变化而引起的光干涉信号达到检测的目的。这有利于蛋白-蛋白相互作用的研究:解离速率筛选,结合常数测定,是/否与靶抗原结合,亲和力成熟和表位结合。

 

产品性能分析

 

  • 抗体滴度测定
  • 抗原结合与否筛查
  • 亚型分析
  • 表位分类
  • 特异性分析
  • 检测方法研发
  • 解离速率排序
  • 结合常数检测

 

  • 先导抗体优化
  • 先导抗体分析
  • 动力学特性分析
  • 表位分类
  • 亲和力成熟
  • FcR/FcRn 结合

 

 

 

  • 抗体滴度测定
  • 抗原结合与否筛查
  • 亚型分析
  • 表位分类
  • 特异性分析
  • 检测方法研发
  • 解离速率排序
  • 结合常数检测
     
  • 先导抗体优化
  • 先导抗体分析
  • 动力学特性分析
  • 表位分类
  • 亲和力成熟
  • FcR/FcRn 结合

 

  • 结合力分析
  • 活性分析
  • 稳定性分析

 

Gator系统

Gator系统由仪器、软件和一系列探针组成。 集成的软件整合了数据收集和分析功能,可实现一步式设置。 探针上宽范围的配体捕获表面可以固定抗体和重组蛋白。 许多ELISA分析方法,包括抗体滴度检测和表型分析,都可以在Gator系统上非常简单地实现。

精选的Gator探针可满足您不同的应用需求。

探针种类

蛋白A

亲和素

蛋白G

Fc

Fc

APS

功能

通过蛋白AFc段的结合标定抗体的浓度。

通过和链霉亲和素,固定有生物素标记的蛋白,进行动力学检测。

通过蛋白GFc段的结合实现抗体的定量测试。

通过抗人Fc抗体和人Fc的结合测定蛋白浓度或动力学指数。

通过抗鼠Fc抗体和鼠Fc的结合测定蛋白浓度或动力学指数。

蛋白通过疏水性直接结合在APS探针表面

应用类型

Q

K

Q / K / QKR

Q / K

Q / K

K

 

线性范围

0。02 2000

µg/mL

 

0.02 2000

µg/mL

0。02 300

µg/mL

0.02 300

µg/mL

 

是否

Y

N

Y

Y

Y

N

 

 

 

利用Gator系统检测表位

 

当抗体与抗原结合时,它并不与整个全长蛋白质结合,而是与蛋白质上一段长度大约五或六个氨基酸的位点结合。因此,一个典型的全长蛋白质序列实际上含有许多与抗体结合的不同的表位。在表位分类中,以成对组合的方式测试抗体,将竞争抗原相同结合区的那些抗体组合成一个分类。表位分类是基于被测试的单克隆抗体组中表示表位的相对概念。

 

Gator系统监测实时结合信号,并根据信号的变化,清楚地显示特定抗原-抗体对是否在同一表位组中。 目前有几种Gator探针(anti-hu-Fc,anti-mouse-Fc,SA)均可用于表位检测。可以选择串联、经典三明治和预混模式设置实验,实验大约需要半个小时, 探针和材料均可重复使用。

 

  • 下图中存在两个不同的表位组。
  • 上清与mAb1 (P1A1)有非常好的结合效率。

 

 

 

表位鉴定结合曲线:以串联模式分析表位鉴定。

 

[使用文档中的独特引言吸引读者的注意力,或者使用此空间强调要点。要在此页面上的任何位置放置此文本框,只需拖动它即可。]

 

mAb1不与抗原结合,相同的表位

mAb1与抗原结合,不同的表位

表位结果不确定

 

 

 

 

利用Gator Protein A探针检测抗体滴度

 

Probe Life的高灵敏度Gator Protein A探针在其表面具有独特的三维化学特性,可以有效并特异性地捕获与Protein A结合的Fc标记蛋白。Protein A探针对任何市售培养基中抗体的动态检测范围为25 ng /mL-2mg /mL ,并且可以通过一个简单的设置分析多种杂交瘤上清液。Gator Protein A探针经过简单的再生条件可以重复使用100次,可在不同的时间内使用相同的探针。

Gator系统检测人IgG与蛋白A探针结合的标准曲线

 

 

参数

定量

 

浓度范围:

       2 mg/mL - 1µg/mL

 

定量时间

 

120 sec

 

震动转速

 

200 rpm

浓度范围:

500 µg/mL

25 ng/mL

 

定量时间

 

300 sec

 

震动速率

 

1000 rpm

中和

 

中和缓冲液

 

Probe Life Q 缓冲液

中和时间 (每循环)

 

5 sec

 

中和循环数

 

3 循环

 

震动速率

 

1000 rpm

再生

再生缓冲液

150 mM NaCl + 10 mM Gly pH2。0

再生时间(每循环)

 

5 sec

 

再生循环数

 

3 循环

 

震动速率

 

1000 rpm

 

 

用蛋白A探针进行人IgG浓度分析的热图

 

 

 

 

利用Gator系统检测动力学常数

 

Gator系统可用于确定与其靶标结合的药物分子的动力学。 该系统能够在使用或不使用标记试剂的情况下快速测量抗体-抗原相互作用的结合速率(k on),解离速率(k off)和平衡解离常数(KD)。 Gator可以确定培养基粗样中抗体文库的解离速率,从而进行初级动力学筛选。对于纯化的抗原-抗体结合对可以实现完整的结合表征。 用于动力学表征的Gator探针,包括hFcmFcSAProAProG,除SA探针以外均易于再生,能多次反复使用。另外,软件可以设置多个实时结合分析实验,获得高质量的结合数据。

使用Gator SA 探针对纯化抗体/抗原进行动力学分析

     time (s)

文本框: nm

特性

  • 同时检测八种不同的结合反应。
  • 20分钟内确定结合常数。
  • 易于方法开发和精确调节分析物浓度范围,以获得准确的动力学常数。
  • 多种探针可选,从而通过不同方式确定动力学参数。

 

 

 

抗体亚型-动力学应用

 

免疫球蛋白,即抗体,可分为五大类:IgAIgDIgE,IgGIgM 不同种属的物种可能在这五大类抗体中具有特定的亚型。 这些亚型的不同之处在于连接抗体恒定区的两条重链之间的二硫键。 例如,在小鼠的IgG中,存在IgG1IgG2aIgG2bIgG3等亚型。

 


Gator关键的应用之一是利用hFcmFc探针鉴定抗体亚型(IgG1,IgG2a等)。 使用动力学程序,用户可以非常容易地鉴定杂交瘤上清液等粗制样品中抗体的亚型。

 

 

Monomer IgD, IgE, IgG

 

 

Dimer IgA

 

 

Pentamer IgM

 

使用Gator mFc探针表征96孔板中杂交瘤上清未知亚型的鼠IgG

 

使用Gator mFc探针进行杂交瘤上清液亚型分析

 

                                                                                                                                                                                


 

特性

  • 粗制样品中抗体亚型的鉴定
  • 高灵敏度
  • 可视化的实时检测结果
  • 可再生探针

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