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非標記生物分子分析儀

GENGXINSHIJIAN:2019-11-05

簡要描述:

GatorXITONGYOUYIQI、RUANJIANHEYIXILIETANZHENZUCHENG。 JICHENGDERUANJIANZHENGHELESHUJUSHOUJIHEFENXIGONGNENG,KESHIXIANYIBUSHISHEZHI。

簡介:

Gator平臺基于Probe Life的生物薄膜干涉光譜技術,可對治療性生物分子的不同研發階段實時檢測。Gator通過收集傳感器探針頂端結合分子數量的變化而引起的光干涉信號達到檢測的目的。這有利于蛋白-蛋白相互作用的研究:解離速率篩選,結合常數測定,是/否與靶抗原結合,親和力成熟和表位結合。

 

產品性能分析

 

  • 抗體滴度測定
  • 抗原結合與否篩查
  • 亞型分析
  • 表位分類
  • 特異性分析
  • 檢測方法研發
  • 解離速率排序
  • 結合常數檢測

 

  • 先導抗體優化
  • 先導抗體分析
  • 動力學特性分析
  • 表位分類
  • 親和力成熟
  • FcR/FcRn 結合

 

 

 

  • 抗體滴度測定
  • 抗原結合與否篩查
  • 亞型分析
  • 表位分類
  • 特異性分析
  • 檢測方法研發
  • 解離速率排序
  • 結合常數檢測
     
  • 先導抗體優化
  • 先導抗體分析
  • 動力學特性分析
  • 表位分類
  • 親和力成熟
  • FcR/FcRn 結合

 

  • 結合力分析
  • 活性分析
  • 穩定性分析

 

Gator系統

Gator系統由儀器、軟件和一系列探針組成。 集成的軟件整合了數據收集和分析功能,可實現一步式設置。 探針上寬范圍的配體捕獲表面可以固定抗體和重組蛋白。 許多ELISA分析方法,包括抗體滴度檢測和表型分析,都可以在Gator系統上非常簡單地實現。

精選的Gator探針可滿足您不同的應用需求。

探針種類

蛋白A

親和素

蛋白G

Fc

Fc

APS

功能

通過蛋白AFc段的結合標定抗體的濃度。

通過和鏈霉親和素,固定有生物素標記的蛋白,進行動力學檢測。

通過蛋白GFc段的結合實現抗體的定量測試。

通過抗人Fc抗體和人Fc的結合測定蛋白濃度或動力學指數。

通過抗鼠Fc抗體和鼠Fc的結合測定蛋白濃度或動力學指數。

蛋白通過疏水性直接結合在APS探針表面

應用類型

Q

K

Q / K / QKR

Q / K

Q / K

K

 

線性范圍

0.02 2000

µg/mL

 

0.02 2000

µg/mL

0.02 300

µg/mL

0.02 300

µg/mL

 

是否

Y

N

Y

Y

Y

N

 

 

 

利用Gator系統檢測表位

 

當抗體與抗原結合時,它并不與整個全長蛋白質結合,而是與蛋白質上一段長度大約五或六個氨基酸的位點結合。因此,一個典型的全長蛋白質序列實際上含有許多與抗體結合的不同的表位。在表位分類中,以成對組合的方式測試抗體,將競爭抗原相同結合區的那些抗體組合成一個分類。表位分類是基于被測試的單克隆抗體組中表示表位的相對概念。

 

Gator系統監測實時結合信號,并根據信號的變化,清楚地顯示特定抗原-抗體對是否在同一表位組中。 目前有幾種Gator探針(anti-hu-Fcanti-mouse-FcSA)均可用于表位檢測。可以選擇串聯、經典三明治和預混模式設置實驗,實驗大約需要半個小時, 探針和材料均可重復使用。

 

  • 下圖中存在兩個不同的表位組。
  • 上清與mAb1 (P1A1)有非常好的結合效率。

 

 

 

表位鑒定結合曲線:以串聯模式分析表位鑒定。

 

[SHIYONGWENDANGZHONGDEDUTEYINYANXIYINDUZHEDEZHUYILI,HUOZHESHIYONGCIKONGJIANQIANGDIAOYAODIAN。YAOZAICIYEMIANSHANGDERENHEWEIZHIFANGZHICIWENBENKUANG,ZHIXUTUODONGTAJIKE。]

 

mAb1不與抗原結合,相同的表位

mAb1與抗原結合,不同的表位

表位結果不確定

 

 

 

 

利用Gator Protein A探針檢測抗體滴度

 

Probe Life的高靈敏度Gator Protein A探針在其表面具有獨特的三維化學特性,可以有效并特異性地捕獲與Protein A結合的Fc標記蛋白。Protein A探針對任何市售培養基中抗體的動態檢測范圍為25 ng /mL-2mg /mL ,并且可以通過一個簡單的設置分析多種雜交瘤上清液。Gator Protein A探針經過簡單的再生條件可以重復使用100次,可在不同的時間內使用相同的探針。

Gator系統檢測人IgG與蛋白A探針結合的標準曲線

 

 

參數

定量

 

濃度范圍:

       2 mg/mL - 1µg/mL

 

定量時間

 

120 sec

 

震動轉速

 

200 rpm

濃度范圍:

500 µg/mL

25 ng/mL

 

定量時間

 

300 sec

 

震動速率

 

1000 rpm

中和

 

中和緩沖液

 

Probe Life Q 緩沖液

中和時間 (每循環)

 

5 sec

 

中和循環數

 

3 循環

 

震動速率

 

1000 rpm

再生

再生緩沖液

150 mM NaCl + 10 mM Gly pH2.0

再生時間(每循環)

 

5 sec

 

再生循環數

 

3 循環

 

震動速率

 

1000 rpm

 

 

用蛋白A探針進行人IgG濃度分析的熱圖

 

 

 

 

利用Gator系統檢測動力學常數

 

Gator系統可用于確定與其靶標結合的藥物分子的動力學。 該系統能夠在使用或不使用標記試劑的情況下快速測量抗體-抗原相互作用的結合速率(k on),解離速率(k off)和平衡解離常數(KD)。 Gator可以確定培養基粗樣中抗體文庫的解離速率,從而進行初級動力學篩選。對于純化的抗原-抗體結合對可以實現完整的結合表征。 用于動力學表征的Gator探針,包括hFcmFcSAProAProG,除SA探針以外均易于再生,能多次反復使用。另外,軟件可以設置多個實時結合分析實驗,獲得高質量的結合數據。

使用Gator SA 探針對純化抗體/抗原進行動力學分析

     time (s)

文本框: nm

特性

  • 同時檢測八種不同的結合反應。
  • 20分鐘內確定結合常數。
  • 易于方法開發和精確調節分析物濃度范圍,以獲得準確的動力學常數。
  • 多種探針可選,從而通過不同方式確定動力學參數。

 

 

 

抗體亞型-動力學應用

 

免疫球蛋白,即抗體,可分為五大類:IgAIgDIgEIgGIgM 不同種屬的物種可能在這五大類抗體中具有特定的亞型。 這些亞型的不同之處在于連接抗體恒定區的兩條重鏈之間的二硫鍵。 例如,在小鼠的IgG中,存在IgG1IgG2aIgG2bIgG3等亞型。

 


Gator關鍵的應用之一是利用hFcmFc探針鑒定抗體亞型(IgG1IgG2a等)。 使用動力學程序,用戶可以非常容易地鑒定雜交瘤上清液等粗制樣品中抗體的亞型。

 

 

Monomer IgD, IgE, IgG

 

 

Dimer IgA

 

 

Pentamer IgM

 

使用Gator mFc探針表征96孔板中雜交瘤上清未知亞型的鼠IgG

 

使用Gator mFc探針進行雜交瘤上清液亞型分析

 

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特性

  • 粗制樣品中抗體亞型的鑒定
  • 高靈敏度
  • 可視化的實時檢測結果
  • 可再生探針

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